本發(fā)明提出一種實(shí)時(shí)觀測(cè)枯草芽孢桿菌生物膜生長(zhǎng)過(guò)程中不同基因表現(xiàn)型細(xì)胞數(shù)量和分布的方法，包括步驟：首先采用三色熒光標(biāo)記的枯草芽孢桿菌菌種，三種熒光標(biāo)記顏色分別對(duì)應(yīng)生物膜生長(zhǎng)過(guò)程中三種主要的細(xì)胞基因表現(xiàn)型細(xì)胞；將一定數(shù)量的細(xì)胞培養(yǎng)溶液嫁接到特定化學(xué)成分的瓊脂培養(yǎng)基上，采用立體顯微鏡及相應(yīng)的濾波片和紅外透射光，觀測(cè)隨著生物膜的生長(zhǎng)不同基因表現(xiàn)細(xì)胞在生物膜中的分布特點(diǎn)及其厚度變化，并對(duì)圖片校準(zhǔn)分析得到每一種基因表現(xiàn)型細(xì)胞的數(shù)量，及它們之間的轉(zhuǎn)化率以及細(xì)菌生物膜生長(zhǎng)的幾何參數(shù)。該方法實(shí)現(xiàn)了在不破壞生物膜的情況下對(duì)生物膜生長(zhǎng)過(guò)程的實(shí)時(shí)觀測(cè)，同時(shí)得到不同基因表現(xiàn)型細(xì)胞的數(shù)量以及分布區(qū)域。