本發(fā)明涉及一種惡性瘧原蟲HRPII蛋白單克隆抗體的制備方法,以惡性瘧原蟲HRPII蛋白為靶抗原,分析選擇A、B兩個(gè)優(yōu)勢(shì)抗原表位;分別將A、B兩個(gè)優(yōu)勢(shì)抗原表位重復(fù)后通過(guò)連續(xù)四個(gè)甘氨酸連接,形成重組蛋白C;采用大腸桿菌最嗜密碼子,將重組蛋白C氨基酸序列轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的核苷酸序列;化學(xué)合成上一步驟得到的核苷酸序列,并在其上下游分別添加酶切位點(diǎn)BamHI和EcoRI;將上一步合成得到的核苷酸片段插入表達(dá)載體PET-28a(+),構(gòu)建重組蛋白C表達(dá)載體,并在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白C;超聲破菌并低溫離心后,取溶液上清通過(guò)鎳瓊脂糖親和層析柱,洗脫得到純化重組蛋白C;重組蛋白C多次免疫Balb/c小鼠后,取其脾臟細(xì)胞與sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,多輪篩選得到6株雜交瘤細(xì)胞株;純化單抗并分別標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP),ELISA正交實(shí)驗(yàn)配定最佳單抗配對(duì)組合。
聲明:
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